高速逆流色谱分离黄柏中的小檗碱和巴马亭云浮处理器收缩机引接线跳线机

高速逆流色谱分离黄柏中的小檗碱和巴马亭

HSCCC2TBE300 型高速逆流色谱仪, 深圳同田生化有限公司;

HD2212C2B 核酸蛋白检测仪, 上海康华生化仪器厂;

R2201 旋转蒸发器, 上海申胜生物技术有限公司;

LC210A T 高效液相色谱仪, 日本岛津色谱仪器公司;

氯仿、甲醇、正丁醇、乙酸均为国产分析纯, 水为重蒸水, 黄柏购于杭州胡庆余堂, 为川黄柏。

1. 2 样品的处理

把黄柏1 000 g 粉碎过20 目筛, 用5 倍量工业酒精浸泡24 h, 连续3 次, 过滤, 合并滤液浓缩后加适量盐酸酸化至木偶pH 等于2, 放置过夜, 过滤得滤液, 滤液可“自解”材料：有望缓解塑料及电子垃圾问题再用N aOH 碱化至pH 等植绒纸于10, 然后用等量氯仿萃取3 次, 氯仿浓缩得浸膏3. 2 g, 该浸膏用于高速逆流色谱分离的样品。

1. 3 HSCCC 溶剂系统选择

溶剂系统参照文献[4, 5 ]选择氯仿: 甲醇: 0. 2 mo l l 稀盐酸组成溶剂体系, 按照各种比例混合,总体积为4 m l, 每次取样品10 m g 溶于溶剂体系, 充分溶解后分层, 取上下相分别点板(硅胶板, 展开剂为: 正丁醇∶乙酸∶水= 7∶1∶2) , 看两相中斑点的大小, 最后发现当氯仿∶甲醇∶0. 2 mo l l稀盐酸的体积比为2∶1∶1 时, 斑点大小大约相等, 所以选氯仿∶甲醇∶0. 2 mo l l 稀盐酸= 2∶1∶1 为溶剂体系。

2 结果及讨论

2. 1 分离结果

溶剂体系为: 氯仿∶甲醇: 0. 2 mo l l 稀盐酸= 2∶1∶1,将其室温下在分液漏斗中充分混合后静置分层(总体积1 000 m l) , 然后取上相为固定相, 下相为移动相。每次进样200 m g 溶于20 m l 的溶剂系统上相, 用注射器一次进样, 流动相流速2 m l m in, 仪器转速800 r m in, 检测器波长254nm , 进样4 h 后, 停止主机转动, 用氮气把固定相推出, 测得保留比为91. 4%。

图1 高速逆流色谱分离黄柏中的生物碱图

经高速逆流色谱分离后显示有三个主要的峰(见图1) , 我们用分部收集器对每个峰都进行了收集, 间隔时间为6m in 每试管,弹簧夹 并用TLC 进行监测, 去掉组分重叠的试管结果得到20. 4m g 的组分 , 64. 8 m g 的组分 , 经HPLC 检测组分 和 的纯度分别为99. 6%和99. 3% , 组分 16. 9m g 为一混合物。

2. 2 结构鉴定

组分I: 黄色针状结晶(乙醇) , 熔点198～ 200 ℃(分解)。IRTmax (KB 5g络真的要来了r) cm - 1: 2 923, 1 605, 1 510, 1 364 (芳香核) , 1H2NMR (DM SO 2d6) D: 3. 25 (2H, t r, J = 6. 0Hz) , 4. 98 (2H, t r, J = 6. 0Hz) , 3. 88, 3. 94, 4. 08 及4. 11 (12H, 4 选择万能拉力机的七个小技巧OCH3, s) , 7. 10 (1H, s) , 7. 73 (1H, s) , 8. 06 (1H, d, J = 910Hz) , 8. 21 (1H, d, J= 9. 0Hz) , 9. 07 (1H, s) , 9. 89 (1H, s) ;M S m z: 352, 337, 322, 308, 为盐酸巴马亭。

<永康p>组分II: 黄色针晶, 熔点201～ 203 ℃(分解)。IRTmax (KB r) cm 21: 1 600, 1 505, 1 364 (芳香核) , 1H2NMR (DM SO 2d6) D: 3. 22 (2H, t r, J = 5. 6Hz) , 4. 95 (2H, t r, J = 5. 6Hz) , 4. 07 及4. 09 (6H, s ) , 6. 17 (2H, s) , 7. 08 (1H, s) , 7. 78 (1H, s) , 8. 02 (1H, d, J = 9. 0Hz) , 8. 20 (1H, d, J = 9. 0Hz) , 8. 94 (1H, s) , 9. 89 (1H, s) ;M S m z: 337, 321, 306, 292, 278, 为盐酸小檗碱。

3 结 论

本文用半制备型高速逆流色谱, 进样量可达200 m g, 对黄柏中生物碱进行分离, 能一次性得到, 说明该方法特别是大制备量的高速逆流色谱仪, 是分离天然产物的一种好方法。

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